石蠟切片是一種常見的組織學(xué)技術(shù)，用于觀察組織的微觀結(jié)構(gòu)。在進(jìn)行石蠟切片實(shí)驗(yàn)時(shí)，有許多細(xì)節(jié)需要注意，這些細(xì)節(jié)往往決定了切片的質(zhì)量和結(jié)果的準(zhǔn)確性。那么石蠟切片Protocol實(shí)驗(yàn)需要注意哪些要點(diǎn)呢？本期內(nèi)容將為你揭示一些關(guān)鍵的細(xì)節(jié)，助你獲得最佳的石蠟切片效果。

1. 組織固定

1）取新鮮組織，分割塊的大小，宜小不宜大，一般不超過1cm3，用預(yù)冷的PBS沖洗，置于10%的福爾馬林固定液中固定24小時(shí)。

2）取出組織，蒸餾水沖洗30分鐘。

2. 組織脫水，包埋，切片

1）自動脫水：設(shè)定脫水程序，70%酒精30min----80%酒精2小時(shí)----95%酒精2小時(shí)----95%酒精2小時(shí)----100%酒精2小時(shí)----100%酒精2小時(shí)。脫水的目的是除去組織中的水分，便于透明、浸蠟、包埋等步驟的進(jìn)行，因?yàn)檫@些程序中所用的藥品都不能與水混合，所以必須脫水。常用的脫水劑為酒精。脫水過程應(yīng)緩慢進(jìn)行，不能操之過急或時(shí)間過長，以免組織變硬變脆或發(fā)生收縮現(xiàn)象。

2）透明: 二甲苯, 30min/次，2次。透明的目的是將脫水劑從材料中除去，使材料透明，增記折光系數(shù)；同時(shí)便于下步的浸蠟和包埋等程序（因?yàn)榫凭荒苋芙馐灒Ｍ该鲃┦且环N既能與脫水劑混合，又能與包埋劑混合的藥劑。常用的透明劑為二甲苯和氯仿，適用原則也是逐級進(jìn)行，可減少材料收縮。

3）浸蠟: 組織經(jīng)透明后放入熔化的石蠟（熔點(diǎn)為52℃）內(nèi)，1小時(shí)/次，3次。浸蠟的目的是逐漸除去透明劑,并為包埋劑所代替。常用的包埋劑是石蠟。浸蠟過程是使石蠟慢慢溶于浸有材料的透明劑中，溶解在透明劑中的石蠟漸漸深入到材料的細(xì)胞中去，最后使透明劑wan全被石蠟取代，以便切片。浸蠟過程一般是從低溫到高溫、從低熔點(diǎn)到高熔點(diǎn)逐漸進(jìn)行，這一過程不能操之過急，否則浸蠟不che底影響切片。此外，軟材料可用熔點(diǎn)較低石蠟，較硬的材料可用熔點(diǎn)較高的石蠟；冬季可用熔點(diǎn)較低的石蠟，夏季可用熔點(diǎn)較高的石蠟。石蠟必須純凈，不含雜質(zhì)。整個浸蠟過程需在恒溫箱內(nèi)進(jìn)行。

4）包埋：將熔化的石蠟倒入包埋框再將組織塊放入，放入時(shí)不能有氣泡，冷卻臺上冷卻30分鐘。注意將樣品編號封于蠟塊上，以免樣品混淆。

5）常規(guī)石蠟切片：厚度6um，連續(xù)切片。

6）石蠟切片脫水：60℃烤片30min，可室溫保存。

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